NY_T 2174-2012 主要热带作物品种AFLP分子鉴定技术规程
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ID： |
93034934B14E44678DC7DFF66740321E |
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文件大小(MB)： |
0.57 |
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页数： |
8 |
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文件格式： |
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日期： |
2024-8-11 |
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ICS 07.080,B04 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2174—2012,主要热带作物品种AFLP分子,鉴定技术规程,Technical code for identifying main tropical crops varieties with,AFLP molecular markers,2012-06-06 发布2012-09-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 2174—2012,前 言,本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草,本标准由中华人民共和国农业部农垦局提出,本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口,本标准起草单位:中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、中国热带农业科学院热带生物技,术研究所、中国热带农业科学院南亚热带作物研究所、中国热带农业科学院橡胶研究所,本标准主要起草人:邹冬梅、蒋昌顺、吴坤鑫、雷新涛、曾霞,I,NY/T 2174—2012,主要热带作物品种AFLP分子鉴定技术规程,1范围,本标准规定了主要热带作物品种AFLP分子鉴定的术语和定义、试剂和材料、仪器和设备、鉴定步,骤、结果计算和鉴定规则,本标准适用于橡胶（Heava加2s，み"sWs Muell-Arg）、芒果（Ma"gげera indica Linn.）、荔枝（Uため,chinensis Sonn.）、龙眼（Di/nocarDas Zo/zgaw Lour.）、香蕉CW〃sa Lour.）、木薯CManihot esculenta,Crants）、柱花草⑸Wosa”比es SW.）的品种AFLP分子鉴定;也可作为其他热带作物品种AFLP分,子鉴定参考,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法,3术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,3.1,遗传相似性 genetic similarity,供检品种与真实品种间在DNA分子遗传上的一致性程度,用遗传相似系数表示,4原理,根据不同热带作物品种基因组DNA存在差异,基因组DNA经限制性内切酶双酶切后分别连上特,定的接头,再进行预扩增和选择性扩增;由于选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性,只有那些限制性位点侧翼的核甘酸与引物的选择性碱基相匹配的限制性片段オ可以被扩增;扩增产物,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后根据凝胶上DNA指纹的有无来鉴定品种间的差异,5试剂与材料,除非另有说明外,在分析中仅使用确认为分析纯试剂。水为GB/T 6682规定的无菌双蒸水或纯度,与之相当的水,5. 1样品DNA提取试剂,5. 1. 1 三羟甲基氨基甲烷（Tris,NHzC（CHzOH）3,CAS：77 - 86 -l）,5. 1.2 氯化氢（HC1,CAS： 7647 - 01 -0）,5. 1.3 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na? ?2旦0。。出42用208 ?2HzO,CAS：6381 - 92 - 6）,5. 1.4 氢氧化钠（NaOH,CAS： 1310-73 - 2）,5. 1.5 氯仿（CHCl,CAS：67 - 66 -3）,5. 1.6 异戊醇（C5 Hlz〇,CAS： 123 51 - 3）,5. 1.7 十六烷基三甲基漠化钱（CTABC6H33（CH3）3NBr,CAS：57 - 09 -0）,5. 1.8 氯化钠（NaCl,CAS：7647- 14- 5）,1,NY/T 2174—2012,5. 1. 9 B -統基乙醇(B - Mercaptoethanol,C2H6OS,CAS：60 - 24 - 2),5. 1. 10 苯酚(C6H6。,CAS： 108- 95 - 2),5. 1. 11 异丙醇(C3H8。,CAS：67 - 63 - 0),5. 1. 12 醋酸钠(CH3coONa,CAS：127 - 09 - 3),5. 1. 13 乙酸(C2 H4 02,CAS： 64 79-7),5. 1. 14 1 mol/L Tris-HCl(pH8. 0):在 80 mL 无菌双蒸水中溶解 12. U g Tris(5.1. 1)加入 4. 2 mL 浓,HCK5. 1. 2)调节pH至8. 0(溶液冷至室温后,最后调定pH),用无菌双蒸水定容至100 mL,5. 1. 15 0.5 mol/L EDTA(pH8.0):在 80 mL 无菌双蒸水中加入 18. 61g 乙二胺四乙酸二钠(5. 1.3),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用氢氧化钠(5. L 4)调节溶液的pH至8.。(约需2 g氢氧化钠)然后用无菌,双蒸水定容至10。mL0,5. 1. 16 氯仿:异戊醇(24 ： 1):先加960 mL氯仿(5.1.5),再加40 mL异戊醇(5.1.6),混合均匀,保,存在棕色玻璃瓶中,4℃保存,5. 1. 17 CTAB 提取缓冲液:称取 4 g CTAB(5.1. 7)和 !6. 364 g NaCl(5.1. 8),量取 1 mol/L Tris-HCl,(5.1.14)20 mL 和 0. 5 mol/L EDTA(5. 1.15)8 mL,先用 70 mL 无菌双蒸水溶解,再定容至 200 mL 灭,菌、冷却后,加入0. 2% B一統基乙醇(5.1. 9)400 kL和氯仿:异戊醇(5.1. 16) ： 100 mL,摇匀即可,5. 1. 18苯酚:氯仿:异戊醇(25 ： 24 ……
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